試薬・溶液レシピ集

目次

大腸菌の培養関連（For bacterial culture）

抗生物質ストック溶液（Antibiotic stock solution）

100 mg/mL Ampicillin (1000x stock solution)

Ampicillin Sodium Salt0.5g
+MilliQ water up to…5mL
*Stored < －20℃ (Freezer)
  1. 0.5 gのアンピシリンナトリウムを5 mLのミリQ水に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.5 g of Ampicillin sodium in 5 mL MilliQ water (in a 15 mL conical tube).
  2. *以下の作業は、クリーンベンチ内で行う。Perform all subsequent procedure within a tissue culture hood. 
  3. 0.22 µmのシリンジフィルターで濾過しつつ、1 mLずつ1.5 mLチューブに分注する。Aliquot 1 mL of the solution per 1.5 mL tube (x5 tubes), while filtering it through a 0.22 µm syringe filter.
  4. チューブの蓋に”Amp”とラベルして、フリーザー（< －20℃）で保存。Label each tube “Amp”, and keep the tubes in a freezer (< −20 ºC).

実際に使うときは、終濃度100 µg/mL（1000倍希釈）になるよう培地に添加する。The working concentration of Ampicillin is 100 µg/mL. For example, to 100 mL LB medium add 100 µL (1/1000 volume) of the Ampicillin stock solution.

30 mg/mL Kanamycin (1000x stock solution)

Kanamycin Sulfate0.15g
+MilliQ water up to…5mL
*Stored < －20℃ (Freezer)
  1. 0.15 gの硫酸カナマイシンを5 mLのミリQ水に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.15 g of Kanamycin sulfate in 5 mL MilliQ water (in a 15 mL conical tube).
  2. *以下の作業は、クリーンベンチ内で行う。Perform all subsequent procedure within a tissue culture hood. 
  3. 0.22 µmのシリンジフィルターで濾過しつつ、1 mLずつ1.5 mLチューブに分注する。Aliquot 1 mL of the solution per 1.5 mL tube (x5 tubes), while filtering it through a 0.22 µm syringe filter.
  4. チューブの蓋に”Kan”とラベルして、フリーザー（< －20℃）で保存。Label each tube “Kan”, and keep the tubes in a freezer (< −20 ºC).

実際に使うときは、終濃度30 µg/mL（1000倍希釈）になるよう培地に添加する。The working concentration of Kanamycin is 30 µg/mL. For example, to 100 mL LB medium add 100 µL (1/1000 volume) of the Kanamycin stock solution.

10 mg/mL Tetracycline (1000x stock solution)

Tetracycline Hydrochloride0.05g
+MilliQ water up to…5mL
*Stored < －20℃ (Freezer)
  1. 0.05 gのテトラサイクリン塩酸塩を5 mLのミリQ水に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.05 g of Tetracycline hydrochloride in 5 mL MilliQ water (in a 15 mL conical tube).
  2. *以下の作業は、クリーンベンチ内で行う。Perform all subsequent procedure within a tissue culture hood. 
  3. 0.22 µmのシリンジフィルターで濾過しつつ、1 mLずつ1.5 mLチューブに分注する。Aliquot 1 mL of the solution per 1.5 mL tube (x5 tubes), while filtering it through a 0.22 µm syringe filter.
  4. チューブの蓋に”Tet”とラベルして、フリーザー（< －20℃）で保存。Label each tube “Tet”, and keep the tubes in a freezer (< −20 ºC).

実際に使うときは、終濃度10 µg/mL（1000倍希釈）になるよう培地に添加する。The working concentration of Tetracycline is 10 µg/mL. For example, to 100 mL LB medium add 100 µL (1/1000 volume) of the Tetracycline stock solution.

培地（Medium）

LB medium（液体培地）*For 500 mL prep.

LB Broth (Lennox, nacalai#20066-95)10g
+DW500mL
*Stored at 4℃ (Refrigerator)
  1. 10 gのLB Broth (Lennox, nacalai#20066-95)を500 mLの蒸留水に溶かす（粉が舞うので、メディウム瓶に先に蒸留水を入れ、その上からLB Brothを入れること）。Mix 10 g of LB Broth with 500 mL of distilled water. (To prevent blowing up of the LB Broth powder, fill the bottle with distilled water first, then add LB Broth.)
  2. 二重にしたアルミホイルで蓋を覆い、オートクレーブインジケーターテープを貼る。Cover the bottle cap with double-layered aluminum foil and place a piece of autoclave indicator tape on the outside on it to show autoclaving success.
  3. オートクレーブ滅菌（121℃、20分間）。Autoclave at 121°C for 20 minutes to sterilize.
  4. 培地が十分に冷めてから4℃で保存する。Store at 4°C after the medium has cooled sufficiently.
TryptonYeast extractNaCl
Luria1050.5
Lennox1055
Miller10510
*代表的なLB (Lysogeny Broth)の組成。全て単位はg/L。

LB plate（寒天培地）*Agar conc. = 1.5% (w/v)

作り方その1 (Method 1) *For 100 mL prep.

LB Broth (Lennox, nacalai#20066-95)2g
精製寒天末（nacalai#01162-15）1.5g
+DW100mL
*Stored at 4℃ (Refrigerator)
  1. 200〜300 mLサイズの三角フラスコを準備する。Prepare an Erlenmeyer flask with a volume of 200〜300 mL.
  2. 2 gのLB Broth (Lennox, nacalai#20066-95)、1.5 gの精製寒天末（nacalai#01162-15）を100 mLの蒸留水に溶かす（粉が舞うので、フラスコに先に蒸留水を入れ、その上からLB Brothを入れること）。Mix 2 g of LB Broth and 1.5 g of agar powder with 100 mL of distilled water. (To prevent blowing up of the LB Broth powder, fill the flask with distilled water first, then add LB Broth.)
  3. フラスコの口を二重にしたアルミホイルで覆い、オートクレーブインジケーターテープを貼る。Cover the mouth of the flask with double-layered aluminum foil and place a piece of autoclave indicator tape on the outside on it to show autoclaving success.
  4. オートクレーブ滅菌（121℃、20分間）。Autoclave at 121°C for 20 minutes to sterilize.
  5. 抗生物質溶液をLB寒天培地に添加する（アンピシリンは熱に弱いので、50℃以下に冷めてから添加すること。首に瓶を当てても耐えられるぐらいが目安）。Add the antibiotic solution to the LB agar medium. (Ampicillin is heat-sensitive and should be cooled below 50°C before adding.)
  6. 約20 mL/plateになるようにLB寒天培地をプレートに注ぎ入れる。Pour the LB agar medium into plates, filling each to a volume of about 20 mL per plate.
  7. 培地が固まったらプレートを裏返し、埃よけにラップをふんわりかけて一晩静置する。Once the medium has solidified, invert the plates and cover them loosely with plastic wrap to shield them from dust. Leave overnight.
  8. プレートの裏側（底側）に日付と抗生物質の種類を記入し、ラップで包んで4℃に保存する。On the back (bottom) of each plate, write the date and type of antibiotic. Wrap plates in plastic wrap and store at 4°C.

作り方その2 (Method 2)

  1. 必要量（20 mL/plate x N枚分）の2〜3倍大きなサイズの三角フラスコを準備する。Prepare an Erlenmeyer flask 2〜3 times larger than the required volume (20 mL/plate x N).
  2. LB medium（液体培地）を準備した三角フラスコに入れ、1.5%（w/v）になるよう精製寒天末（nacalai#01162-15）を添加し、よく混合する（寒天はこの時点で溶けない）。Pour LB medium into the triangular flask, then add agar powder to a concentration of 1.5% (w/v) and mix thoroughly. (Agar does not dissolve at this time).
  3. ラップをフラスコの口にふんわりかけ、電子レンジで加熱し寒天を溶解させる。*容量にもよるが、500〜600 Wでトータル2、3分。途中、吹きこぼれないよう注意する。Loosely cover the opening of the flask with plastic wrap and heat the solution in a microwave oven to dissolve the agar. (*Depending on the wattage, microwave at 500〜600 W for a total of 2 or 3 minutes. Take care not to spill the agar while heating.)
  4. あとは”作り方その1″と同様にする。The remaining steps are performed in the same manner as outlined in “Method 1”.

緩衝液や各種溶液（Buffers and solutions）

1x TE Buffer（1x Tris-EDTA Buffer）

final conc.
1 M Tris-HCl (pH X)0.5mL(10 mM)
0.5 M EDTA0.1mL(1 mM)
+MilliQ water up to…50mL
*Stored at RT
  1. 0.5 mLの1 M Tris-HCl溶液と0.01 mLの0.5 M EDTA溶液を50 mLのコニカルチューブに入れる。Measure out 0.5 mL of 1 M Tris-HCl and 0.01 mL of 0.5 M EDTA into a 50 mL conical tube.
  2. ミリQ水で50 mLにメスアップする。Dilute with MilliQ water to 50 mL.
  3. 常温で保存。Store at room temperature.

DEPC treated water

Milli Q water500mL
+Diethylpyrocarbonate (DEPC)0.5mLto 0.1% (v/v)
*Stored at RT
  1. メディウム瓶に500 mLのミリQ水を入れる。Pour 500 mL of MilliQ water into a media bottle.
  2. DEPCを0.5 mL加え、よく振り混ぜる。Add 0.5 mL of DEPC and shake vigorously.
  3. 37℃で2時間以上、あるいは常温で一晩放置する。Allow it to stand at 37°C for 2 hours or overnight at room temperature.
  4. 121℃で20分オートクレーブ。（*DEPCの分解）Autoclave at 121°C for 20 minutes to decompose the DEPC.
  5. 常温で保存。Store at room temperature.

10% (w/v) Ammonium persulfate (APS)

Ammonium persulfate {(NH4)S2O8}0.5gto 10% (w/v)
+MilliQ water up to…5mL
*Stored at 4℃ (Refrigerator)
  1. 0.5 gのAmmonium persulfateを5 mLのミリQ水に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.5 g of Ammonium persulfate in 5 mL MilliQ water (in a 15 mL conical tube).
  2. 冷蔵庫（4℃）で保存。Keep the solution in a refrigerator (4℃).

1 M Dithiothreitol (DTT)

Dithiothreitol {HSCH2CH(OH)CH(OH)CH2SH}, Mw = 154.250.77gto 1 M
+MilliQ water up to…5mL
*Stored < －20℃ (Freezer)
  1. 0.77 gのDithiothreitolを5 mLのミリQ水に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.77 g of Dithiothreitol in 5 mL MilliQ water (in a 15 mL conical tube).
  2. 1 mLずつ1.5 mLチューブに分注する。Aliquot 1 mL of the solution per 1.5 mL tube (x5 tubes).
  3. チューブの蓋に”1 M DTT”とラベルして、冷凍庫（< －20℃）で保存。Label each tube “1 M DTT”, and keep the tubes in a freezer (< −20 ºC).

タンパク質サンプルに、終濃度20〜100 mMになるように１M DTT溶液を加える。あるいは、 2x Laemmliサンプルバッファーに終濃度40〜200 mMになるように１M DTT溶液を加える。Add 1 M DTT solution to protein sample to the final concentration of 20〜100 mM. (…or Add 1 M DTT solution to 2x Laemmli sample buffer to 40〜200 mM.)

8 M Urea

Urea {NH2CONH2}, Mw = 60.0619.2gto 8 M
+MilliQ water up to…40mL
*Stored at RT
  1. 19.2 gの尿素（Urea）を40 mLのミリQ水に溶かす（50 mLコニカルチューブ）。約30 mLのミリQ水に溶かした後に、メスアップする（チューブの目盛でOK）。Dissolve 19.2 g of Urea in 50 mL MilliQ water (in a 50 mL conical tube). Start with about 80% of the final desired volume to dissolve the urea, and then add more water to reach the desired volume. 
  2. 常温で保存。Store at room temperature.

尿素の水への溶解は吸熱反応です。その為、溶液がかなり冷える（尿素がより溶けにくくなる）のでウォーターバス等で少し（〜37℃）温めながらの方が良いでしょう。Because the dissolution of urea in water is an endothermic process, the temperature of the solution will decrease. You may need to raise the temperature of the solution (〜37ºC) using a water bath to ensure complete dissolution of the urea.

100 mM Phenylmethylsulfonyl Fluoride (PMSF)

Phenylmethylsulfonyl Fluoride {PhCH2SO2F}, Mw = 174.190.087gto 100 mM
+Isopropanol up to…5mL
*Stored < －20℃ (Freezer)
  1. 0.087 gのPhenylmethylsulfonyl Fluoride（PMSF）を5 mLのイソプロパノール（2-プロパノール）に溶かす（15 mLコニカルチューブ）。Dissolve 0.087 g of phenylmethylsulfonyl fluoride（PMSF） in 5 mL isopropanol (in a 15 mL conical tube).
  2. 1 mLずつ1.5 mLチューブに分注する。Aliquot 1 mL of the solution per 1.5 mL tube (x5 tubes).
  3. チューブの蓋に”100 mM PMSF”とラベルして、冷凍庫（< －20℃）で保存。Label each tube “100 mM PMSF”, and keep the tubes in a freezer (< −20 ºC).

通常、終濃度0.5〜1 mMになるようにタンパク質溶液に添加する。Typically, add the PMSF solution to the protein sample to a final concentration of 0.5〜1 mM.

Detergent solutions (10%, v/v)

Detergent (Tween 20, Triton X-100, etc)5mLto 10% (v/v)
+MilliQ water up to…50mL
*Stored at RT
  1. 界面活性剤（Tween 20, Triton X-100など）5 mLを50 mLコニカルチューブに量りとる。*コニカルチューブの目盛で合わせて良い。液体の界面活性剤は粘性が高いことが多いので、駒込ピペット等で正確に量りとることが難しいため。Measure out 5 mL of detergent (such as Tween 20 or Triton X-100) into a 50 mL conical tube. You can use the 5-mL graduation line on the conical tube to measure this volume. Liquid detergents are typically quite viscous, making precise measurements challenging with a pipette, for example.
  2. ミリQ水を約40 mLのところまで加え、シーソー型振とう機や回転式ミキサーを用いて穏やかに振とうして界面活性剤と水を混合する。*ボルテックスなど激しく攪拌することは避ける（泡立つため）。Add approx. 40 mL of Milli-Q water and gently mix the detergent and water by shaking with a seesaw shaker or rotary mixer. Avoid vigorous stirring or vortexing to prevent foaming.
  3. ミリQ水で50 mLにメスアップする。*コニカルチューブの目盛で合わせて良い。Dilute with MilliQ water to 50 mL.

1 M Tris-HCl（500 mL）

  1. メディウム瓶に400 mLのミリQ水を入れる。
  2. Tris base (=Tris(hydroxymethyl)aminomethane, Mw: 121.14) 60.57 gを上記ミリQ水に溶解させる。
  3. HCl水溶液（conc. HCl、6 mol/L HCl aq.など）で望みのpHに調整する。
  4. ミリQ水で500 mLにメスアップした後、121℃で20分オートクレーブ。
  5. 常温で保存。
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